1標本的采取和保存 可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清),分泌物(唾液)和排泄物(如尿液,糞便)等。均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份.有些標本可直接進行測定(如血清,尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物).大部分ELISA檢測均以血清為標本.血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清.制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固,血塊收縮后即可取得.除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標本.在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用.血清標本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色.血清標本宜在新鮮時檢測.如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng).如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存.凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩.混濁或有沉淀的血清標本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測.反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存.保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當防腐劑. 2試劑的準備 按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑.ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正.從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存. 3加樣 在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結(jié)合物,加底物.加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡.
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